A eletroforese em gel é um dos principais métodos utilizados em biologia molecular para a análise de DNA. Este método envolve a migração de fragmentos de DNA através de um gel, onde são separados com base no tamanho ou formato. No entanto, você já encontrou algum erro durante seus experimentos de eletroforese, como faixas manchadas no gel de agarose ou ausência de faixas no gel? Qual poderia ser a causa desses erros?
Nossos técnicos resumiram algumas soluções de problemas aqui para sua referência.
1. Bandas manchadas em gel de agarose
●O DNA foi degradado. Evite a contaminação por nuclease.
● O tampão de eletroforese não é novo. Após o uso repetido do tampão de eletroforese, a força iônica diminui e seu valor de pH aumenta, de modo que a capacidade do tampão enfraquece, o que afeta o efeito da eletroforese. Recomenda-se substituir frequentemente o tampão de eletroforese.
● Foram utilizadas condições inadequadas de eletroforese. Não permita que a tensão exceda 20 V/cm e mantenha uma temperatura <30° C durante a eletroforese. Para a eletroforese de fita gigante de DNA, a temperatura deve ser <15° C. Verifique se o tampão de eletroforese tem capacidade tampão suficiente.
● Foi carregado demasiado ADN no gel. Diminua a quantidade de DNA.
● Muito sal no DNA. Use precipitação com etanol para remover o excesso de sais antecipadamente.
● O DNA estava contaminado com proteína. Use extrações de fenol para remover proteínas antecipadamente.
● O DNA foi desnaturado. Não aqueça antes da eletroforese. Diluir o DNA em tampão com NaCl 20 mM.
2. Anomalias na migração de bandas de DNA
● Renaturação do sítio COS do fragmento λHind III. Aqueça o DNA por 5 minutos a 65°C antes da eletroforese e depois resfrie-o em uma unidade de gelo por 5 minutos.
● Foram utilizadas condições inadequadas de eletroforese. Não permita que a tensão exceda 20 V/cm e mantenha uma temperatura <30° C durante a eletroforese. Verifique se o buffer de eletroforese tem capacidade suficiente.
● O DNA foi desnaturado. Não aqueça antes da eletroforese. Diluir o DNA em tampão com NaCl 20 mM.
3. Bandas de DNA fracas ou ausentes no gel de agarose
● Houve quantidade ou concentração insuficiente de DNA carregado no gel. Aumentar a quantidade de DNA. A eletroforese em gel de poliacrilamida é ligeiramente mais sensível que a eletroforese em agarose e a carga da amostra pode ser reduzida adequadamente.
● O DNA foi degradado. Evite a contaminação por nuclease.
● O DNA foi submetido a eletroforese do gel. Eletroforese o gel por menos tempo, use uma voltagem mais baixa ou use uma porcentagem de gel mais alta.
● Foi utilizada fonte de luz W inadequada para visualização de DNA corado com brometo de etídio. Use uma luz W de comprimento de onda curto (254 nm) para maior sensibilidade.
4. Bandas de DNA faltando
●O DNA de tamanho pequeno foi submetido a eletroforese no gel. Eletroforese o gel por menos tempo, use uma voltagem mais baixa ou use uma porcentagem de gel mais alta.
● Difícil distinguir as bandas de DNA de moléculas semelhantes. Aumente o tempo de eletroforese e verifique a concentraçãodo gel para garantir a porcentagem correta de gel a ser utilizada.
● O DNA foi desnaturado. Não aqueça antes da eletroforese. Diluir o DNA em tampão com NaCl 20 mM.
● As cadeias de ADN são enormes e a electroforese em gel convencional não é adequada. Analise em eletroforese em gel de pulso.Que outros problemas você teve com a eletroforese em gel de agarose? Pesquisaremos mais para guias no futuro.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) é uma empresa especializada com foco em produtos relacionados à eletroforese na China. A sua história começa em 1970, quando a China ainda não tinha entrado no período de reforma e abertura. Ao longo de anos de desenvolvimento, a Liuyi Bitotech possui sua própria marca, conhecida como Marca Liuyi no mercado interno de produtos de eletroforese.
A marca Liuyi tem mais de 50 anos de história na China e a empresa pode fornecer produtos estáveis e de alta qualidade em todo o mundo. Através de anos de desenvolvimento, vale a pena sua escolha!
As células de eletroforese horizontais (tanques/câmaras) da Liuyi Biotech são de alta qualidade e boa aparência. Com diferentes tamanhos de bandejas de gel, elas podem atender às suas diferentes necessidades experimentais. Temos nossa própria equipe técnica e fábrica. Do projeto à fabricação, das matérias-primas às peças principais, podemos controlar todo o processo. A série DYCP 31 é para eletroforese de DNA, que são modelosDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, eDYCP-31E. As diferenças entre eles são os tamanhos e o preço do gel. Fornecemos tamanhos completos de produtos para nossos clientes. O modeloDYCP-32Cpode fazer o maior gel 250 mm * 250 mm.
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Horário da postagem: 09 de maio de 2022