Preparação de eletroforese e aplicação de amostra em membrana de acetato de celulose

Membrana de pré-processamento de acetato de celulose

Membrana de corte:

Corte a membrana de acetato de celulose em tamanhos específicos com base na quantidade de amostras separadas, normalmente 2,5cmx11cm ou 7,8cmx15cm.

Linha de aplicação de amostra de marcação:

• No lado não brilhante da membrana, marque levemente a linha de aplicação da amostra com um lápis.
• A localização da linha de aplicação pode ser escolhida a 2-3 cm de uma extremidade da membrana ou às vezes perto da linha central.
• A posição da linha de aplicação é geralmente determinada com base em experimentos preliminares de eletroforese.

Imersão em solução tampão de eletrodo:

• Em um prato raso ou prato de cultura, despeje a solução tampão de eletrodo.
• Flutue cuidadosamente a membrana na superfície da solução tampão do eletrodo, garantindo que o lado não brilhante fique voltado para baixo.
• À medida que a parte inferior da membrana absorve a solução tampão do eletrodo, ela afunda gradualmente até ficar totalmente submersa.

Removendo e absorvendo o excesso de líquido:

• Após a membrana ter permeado a solução tampão do eletrodo, use uma pinça romba para removê-la cuidadosamente.
• Coloque a membrana entre duas camadas de papel filtro para absorver o excesso de solução tampão do eletrodo, evitando ressecamento excessivo.
• Se aparecer uma área branca opaca na membrana, indicando secagem excessiva, mergulhe novamente a membrana em solução tampão de eletrodo e absorva até o grau apropriado com papel de filtro.

Exemplo de processo de inscrição

Escolhendo e Operando na Linha de Aplicação de Amostra:

Aplique a amostra ao longo da linha de aplicação da amostra no lado não brilhante da membrana, geralmente em um padrão linear em vez de uma aplicação pontual.

Aplicação de amostra de análise qualitativa:

• Use tubos capilares (com diâmetro de 0,5 ~ 1,0 mm) ou moldes para aplicação de amostras de análise qualitativa.
• Durante a análise qualitativa, mergulhe a amostra e “carimbe-a” ao longo da linha de aplicação da amostra.

Aplicação de amostra de análise quantitativa:

• Use uma seringa de microlitro para aplicação de amostra de análise quantitativa.
• Ao usar um tubo capilar ou seringa de microlitro, mova-o suavemente para cima e para baixo ou para a esquerda e para a direita ao longo da linha de aplicação da amostra até que o volume predeterminado da amostra seja aplicado.

Controlando as Dimensões da Linha de Amostra:

• Depois de aplicar cada amostra na membrana, o comprimento da linha de amostra é geralmente de 1,5 cm, com largura geralmente não superior a 4 mm.
• A distância entre as linhas de amostra e entre a linha de amostra e a borda longa da membrana é geralmente de 3 a 5 mm.

Ajustando o volume da amostra:

A quantidade ou volume da amostra aplicada varia significativamente dependendo de fatores como concentração da amostra, coloração e métodos analíticos.

Volume da amostra durante a análise quantitativa:

Para análise quantitativa, o volume da amostra aplicada em cada centímetro da linha de aplicação da amostra é geralmente de 0,1-0,5μl, equivalente à quantidade de uma amostra de proteína de 5-1000μg.

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Experimento para separação de proteínas séricas por eletroforese em membrana de acetato de celulose

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