Princípio
A eletroforese de filme de acetato de celulose é um método de eletroforese que utiliza um filme de acetato de celulose como suporte. O fenômeno no qual partículas carregadas se movem em direção ao eletrodo oposto sob a ação de um campo elétrico é denominado eletroforese. Como cada proteína possui um ponto isoelétrico específico, se uma proteína for colocada em uma solução com pH inferior ao seu ponto isoelétrico, a proteína ficará carregada positivamente e se moverá em direção ao eletrodo negativo. Pelo contrário, move-se para o pólo positivo. Como a velocidade das moléculas de proteína que se movem num campo eléctrico está relacionada com a sua carga, a forma e o tamanho das moléculas, diferentes proteínas podem ser separadas por electroforese. O soro contém uma variedade de proteínas, todas com pontos isoelétricos em pH 7,5 ou menos. Quando o soro é colocado em tampão de pH 8,6 para realizar a eletroforese, todas as proteínas do soro ficam carregadas negativamente e se movem para o lado positivo no campo elétrico. Como várias proteínas séricas têm cargas diferentes no mesmo pH, as partículas moleculares têm tamanhos diferentes e, portanto, a velocidade de migração é diferente e são separadas por eletroforese. Os pontos isoelétricos e pesos moleculares das proteínas séricas são mostrados na tabela abaixo:
| Proteína | Pontos isoelétricos (PI) | Peso molecular |
| Albumina | 4,88 | 69.000 |
| α1-glolina | 5h00 | 200.000 |
| α2-glolina | 5.06 | 300.000 |
| β-glolina | 5.12 | 9.000 ~ 150.000 |
| γ-glolina | 6,85~7,50 | 156.000 ~ 300.000 |
O experimento consiste em separar diferentes proteínas no soro sanguíneo com membrana de acetato de celulose (abr. CAM) como meio de suporte. CAM é uma espécie de banheiro de espumaefilme com boa uniformidade e espessura de 0,1 mm a 1,5 mm, que possui certa absorção de água.
Materiais, instrumentos e reagentes para eletroforese CAM
Amostras:soro de sangue humano saudável
Instrumento:fonte de alimentação DYY-6C, tanque de eletroforese DYCP-38C, carregamento de amostra superior WD-9404
Os reagentes
1) membrana de acetato de celulose 7X9cm
2) Solução tampão de barbitol PH 8,6 (força iônica 0,05-0,09, é 0,06 tempo de intervalo): tome 1,84g de ácido dietilbarbitúrico e, em seguida, tome 1,03g de dietil pentobarbital de sódio, adicione um pouco de água destilada para aquecer para dissolver e faça até 1000ml;
3) Mancha: Ponceau S 0,2g, Tricloroacético 3g, adicionar 100ml de água destilada;
4) TBS/T ou PBS/T: 45ml de etanol 95%, 5ml de ácido acético glacial, adicionar 50ml de água destilada;
5) Solução de limpeza: 70ml de etanol anidro, 30ml de ácido acético glacial.
Método Experimentald
1) Prepare a membrana: Mergulhe a membrana na solução tampão de barbitol 30min-8h, retire-a e retire o excesso da solução com papel absorvente.
2) Carregamento de amostras: Distinguir o lado áspero e o lado liso da membrana e marcar uma linha a 1,5 cm de distância da extremidade superior do lado áspero. Carregue amostras com uma ferramenta superior de carregamento de amostras no lado áspero. Nota: As amostras devem ser carregadas no lado áspero da membrana. Após as amostras de soro terem penetrado totalmente na membrana, vire a membrana, coloque o lado áspero (com as amostras) voltado para baixo no tanque e a extremidade com as amostras é colocada no eletrodo negativo.
3) Eletroforese: Ligue a fonte de alimentação, 0,4～Membrana de 0,6m A/cm, o tempo de execução é de 30-45 min. Após executar a eletroforese, desligue a energia.
4) Manchar e limpar: Retire a membrana do tanque e mergulheit na solução de corante por 5 minutos e, em seguida, limpe-o na solução de limpeza repetidamente por 3-4 vezes até que a cor de fundo fique clara. As proteínas séricas devem ser mostradas nas bandas, e normalmente existem cinco zonas, formando a extremidade superior da linha marcada, Albumina, α1-gloulina, α2-gloulina, β-gloulina, γ-gloulina.
5) Preservação: coloque a eletroforese secabandaem solução de limpeza por 10-15 minutos, depois retire e cole em um vidro limpo, depois de secar, se tornará um filme transparentebanda.
ExperimentarResultado
O efeito de separação das amostras de soro é bom e não há fenômeno de banda residual. A repetibilidade dos resultados varia devido aos procedimentos de teste e aos métodos do experimentador, e a repetibilidade é alta.
Conclusão
O sistema rápido de detecção de eletroforese clínica (Tanque de eletroforeseDYCP-38C,fonte de energiaDYY-6C e carregamento de amostra superior WD-9404) produzido por nossoempresa Pequim Liuyi Biotecnologia Co., Ltdatende aos requisitos experimentais,eos resultados são reprodutíveis, simples e rápidos, adequados paraensinopesquisar.
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Horário da postagem: 14 de novembro de 2022