Introdução
A eletroforese em gel é uma técnica fundamental em biologia molecular, amplamente utilizada para a separação de proteínas, ácidos nucléicos e outras macromoléculas. O controle adequado do volume da amostra, voltagem e tempo de eletroforese é crucial para obter resultados precisos e reprodutíveis.Nosso colega de laboratório oferecemelhores práticas para gerenciar esses parâmetros durante a eletroforese em gel SDS-PAGE.
Produtos de eletroforese em gel Beijing Liuyi Biotechnology
Volume de amostra: garantindo consistência
Ao realizar a eletroforese SDS-PAGE, o volume da amostra é um fator chave que pode impactar significativamente a resolução dos seus resultados. Geralmente é recomendado carregar 10 μL de proteína total por poço. Para garantir a consistência e evitar a difusão da amostra entre poços adjacentes, é importante carregar um volume igual de tampão de carga 1x em todos os poços vazios. Esta precaução ajuda a evitar a propagação de amostras em pistas vizinhas, o que pode ocorrer se o poço for deixado vazio.
Antes de carregar as suas amostras, comece sempre por adicionar um marcador de peso molecular a um poço. Isto permite a fácil identificação dos tamanhos das proteínas após a eletroforese.
Controle de tensão: equilíbrio entre velocidade e resolução
A voltagem aplicada durante a eletroforese afeta diretamente a velocidade com que as amostras migram através do gel e a resolução da separação. Para SDS-PAGE é aconselhável começar com uma tensão baixa em torno de 80V. Esta baixa voltagem inicial permite que as amostras migrem lenta e uniformemente, concentrando-as numa faixa nítida à medida que entram no gel de separação.
Uma vez que as amostras tenham entrado completamente no gel de separação, a tensão pode ser aumentada para 120V. Esta voltagem mais elevada acelera a migração, garantindo que as proteínas sejam separadas de forma eficiente de acordo com o seu peso molecular. É essencial monitorar o progresso da frente do corante azul de bromofenol, que indica a conclusão da eletroforese. Para géis com uma concentração de 10-12%, 80-90 minutos são normalmente suficientes; no entanto, para géis a 15%, pode ser necessário prolongar ligeiramente o tempo de execução.
Gerenciamento de tempo: saber quando parar
O tempo é outro fator crítico na eletroforese em gel. A aplicação do gel por um período muito longo ou muito curto pode levar a uma separação abaixo do ideal. A migração do corante azul de bromofenol é um indicador útil: quando atinge o fundo do gel, geralmente é hora de interromper a corrida. Para géis padrão, tais como 10-12%, uma duração de eletroforese de cerca de 80-90 minutos é normalmente adequada. Para géis percentuais mais elevados, como 15%, o tempo de execução deve ser prolongado para garantir a separação completa das proteínas.
Gerenciamento de buffer: reutilizando e preparando buffers
O tampão de eletroforese pode ser reutilizado 1 a 2 vezes, dependendo das condições específicas do seu laboratório. No entanto, para obter melhores resultados, recomenda-se preparar tampão 10x novo e diluí-lo imediatamente antes de usar. Isto garante que o tampão mantém a sua eficácia, levando a resultados de eletroforese mais confiáveis.
Produtos de eletroforese em gel Beijing Liuyi Biotechnology
Ao controlar cuidadosamente o volume da amostra, a voltagem e o tempo de eletroforese, você pode melhorar significativamente a precisão e a reprodutibilidade dos resultados da eletroforese em gel. A implementação dessas práticas recomendadas em seu trabalho de laboratório ajudará você a obter bandas mais claras e distintas, levando a melhores dados para análise posterior.
Se você tiver mais métodos bons para otimizar o experimento de eletroforese em gel, seja bem-vindo para discutir conosco!
Ltd (Liuyi Biotechnology) é especializada na fabricação de instrumentos de eletroforese há mais de 50 anos com nossa própria equipe técnica profissional e centro de P&D. Temos uma linha de produção confiável e completa, desde o projeto até a inspeção e armazém, bem como suporte de marketing. Nossos principais produtos são célula de eletroforese (tanque / câmara), fonte de alimentação de eletroforese, transiluminador LED azul, transiluminador UV, sistema de imagem e análise de gel, etc. Também fornecemos instrumentos de laboratório como instrumento de PCR, misturador de vórtice e centrífuga para laboratório.
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Horário da postagem: 20 de agosto de 2024