A eletroforese em gel de DNA é uma técnica comum de biologia molecular usada para separar e analisar fragmentos de DNA com base em seus tamanhos. O processo envolve carregar fragmentos de DNA de tamanhos diferentes em um gel feito de agarose, um carboidrato encontrado em algas vermelhas.
Preparando e moldando o gel de agarose
- Dissolva a agarose em uma quantidade apropriada de tampão de eletroforese. A concentração do gel é determinada pela relação massa/volume, como 1g de agarose em 100ml de tampão para um gel a 1%.
- Aqueça a mistura no microondas, girando o recipiente para garantir a dissolução completa da agarose.
- Adicione brometo de etídio à solução de gel até uma concentração final de 0,5mg/ ml. O brometo de etídio intercala-se entre pares de bases de DNA adjacentes e emite fluorescência laranja sob luz UV. Observe que o brometo de etídio é cancerígeno, portanto, seu manuseio requer medidas de segurança adequadas, como o uso de luvas.
- Resfrie a solução de gel em banho-maria para evitar que a bandeja de gel deforme devido a altas temperaturas.
- Coloque um pente na solução de gel para formar poços de amostra. Selecione pentes adequados para a quantidade de amostra de DNA que você carregará. Despeje a solução de gel de agarose nobandeja de gele deixe solidificar à temperatura ambiente.
- Assim que o gel solidificar, retire o pente. Se você não for usar o gel imediatamente, embrulhe-o em filme plástico e guarde-o a 4°C até ser necessário.
Preparando e executando o gel
Antes de iniciar a eletroforese, misture a amostra de DNA com tampão de carga. O tampão de carga é geralmente seis vezes mais concentrado e ajuda a amostra a afundar no fundo dos poços e a rastrear o movimento durante a eletroforese.
Defina a fonte de alimentação para a tensão especificada.
Adicione tampão de eletroforese suficiente ao tanque de gel para cobrir a superfície do gel.Garantiras conexões corretas dos eletrodos.
Carregue a amostra de DNA e os marcadores de peso molecular nos poços de gel.
Ligue a fonte de alimentação para iniciar a eletroforese.
Observando fragmentos de DNA separados
Após a eletroforese, desligue a fonte de alimentação e remova o gel.
Use uma fonte de luz UV para iluminar o gel; Os fragmentos de DNA aparecerão como faixas fluorescentes laranja.
Documente a imagem do gel para analisar os fragmentos de DNA separados.
Após o experimento, garanta o descarte adequado do gel e do tampão de eletroforese, seguindo as orientações do laboratório. Use sempre luvas ao manusear géis e tampões contendo brometo de etídio para proteger contra a exposição a esta substância perigosa.
A eletroforese em gel de DNA é amplamente utilizada em pesquisas de biologia molecular e genética para estimar tamanhos de moléculas de DNA, separar fragmentos de DNA, detectar mutações genéticas e impressões digitais de DNA, entre outras aplicações. É uma técnica experimental simples e eficaz que auxilia na compreensão da composição e características das amostras de DNA.
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Horário da postagem: 08/08/2023