A eletroforese em gel de DNA é uma técnica comum de biologia molecular usada para separar e analisar fragmentos de DNA com base em seus tamanhos.O processo envolve carregar fragmentos de DNA de tamanhos diferentes em um gel feito de agarose, um carboidrato encontrado em algas vermelhas.
Preparando e moldando o gel de agarose
- Dissolva a agarose em uma quantidade apropriada de tampão de eletroforese.A concentração do gel é determinada pela relação massa/volume, como 1g de agarose em 100ml de tampão para um gel a 1%.
- Aqueça a mistura no microondas, girando o recipiente para garantir a dissolução completa da agarose.
- Adicione brometo de etídio à solução de gel até uma concentração final de 0,5mg/ ml.O brometo de etídio intercala-se entre pares de bases de DNA adjacentes e emite fluorescência laranja sob luz UV.Observe que o brometo de etídio é cancerígeno, portanto, seu manuseio requer medidas de segurança adequadas, como o uso de luvas.
- Resfrie a solução de gel em banho-maria para evitar que a bandeja de gel deforme devido a altas temperaturas.
- Coloque um pente na solução de gel para formar poços de amostra.Selecione pentes adequados para a quantidade de amostra de DNA que você carregará.Despeje a solução de gel de agarose nobandeja de gele deixe solidificar à temperatura ambiente.
- Assim que o gel solidificar, retire o pente.Se você não for usar o gel imediatamente, embrulhe-o em filme plástico e guarde-o a 4°C até ser necessário.
Preparando e executando o gel
Antes de iniciar a eletroforese, misture a amostra de DNA com tampão de carga.O tampão de carga é geralmente seis vezes mais concentrado e ajuda a amostra a afundar no fundo dos poços e a rastrear o movimento durante a eletroforese.
Defina a fonte de alimentação para a tensão especificada.
Adicione tampão de eletroforese suficiente ao tanque de gel para cobrir a superfície do gel.Garantiras conexões corretas dos eletrodos.
Carregue a amostra de DNA e os marcadores de peso molecular nos poços de gel.
Ligue a fonte de alimentação para iniciar a eletroforese.
Observando fragmentos de DNA separados
Após a eletroforese, desligue a fonte de alimentação e remova o gel.
Use uma fonte de luz UV para iluminar o gel;Os fragmentos de DNA aparecerão como faixas fluorescentes laranja.
Documente a imagem do gel para analisar os fragmentos de DNA separados.
Após o experimento, garanta o descarte adequado do gel e do tampão de eletroforese, seguindo as orientações do laboratório.Use sempre luvas ao manusear géis e tampões contendo brometo de etídio para proteger contra a exposição a esta substância perigosa.
A eletroforese em gel de DNA é amplamente utilizada em pesquisas de biologia molecular e genética para estimar tamanhos de moléculas de DNA, separar fragmentos de DNA, detectar mutações genéticas e impressões digitais de DNA, entre outras aplicações.É uma técnica experimental simples e eficaz que auxilia na compreensão da composição e características das amostras de DNA.
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Horário da postagem: 08/08/2023