O sistema de transferência semi-seco DYCP-40C é usado em conjunto com a fonte de alimentação de eletroforese para transferir as proteínas nos géis de poliacrilamida para a membrana como membrana de nitrocelulose, membrana de náilon e membrana de PVDF.O blotting semi-seco é realizado com eletrodos de placa de grafite em uma configuração horizontal, imprensando um gel e uma membrana entre folhas de papel de filtro embebidas em tampão que funcionam como reservatório de íons.Durante a transferência eletroforética, moléculas carregadas negativamente migram para fora do gel e movem-se em direção ao eletrodo positivo, onde são depositadas na membrana.Os eletrodos de placa, separados apenas pelo gel e pela pilha de papel de filtro, fornecem alta intensidade de campo (V/cm) através do gel, realizando transferências rápidas e muito eficientes.A superfície de transferência da célula de eletroforese DYCP – 40C menor é 150 × 150 (mm), adequada para transferir géis padrão, incluindo aqueles da célula de eletroforese DYCZ-24DN e DYCZ-24EN.
Vamos aprender mais sobre o funcionamento deste aparelho trans blot semi-seco.
Materiais, instrumentos para operação do DYCP-40C
Fonte de alimentação para eletroforese DYY-6C, aparelho trans blot semi-seco DYCP-40C, solução tampão e recipientes para solução tampão.etc.
Etapas da operação
1. Coloque o gel com placas de vidro na solução tampão de transferência
2. Meça o tamanho do gel
3.Prepare 3 pedaços de papel filtro de acordo com o tamanho do gel, sendo que o tamanho do papel filtro deve ser um pouco maior que o tamanho do gel;Aqui usamos papel de filtro Whatman;
4.Coloque 3 pedaços de papel de filtro na solução tampão lentamente, e deixe o papel de filtro imergir totalmente no tampão, evitando bolhas de ar;
5.Preparar e cortar membrana de nitrocelulose de acordo com o tamanho do gel e papel filtro;o tamanho da membrana de nitrocelulose deve ser maior que o tamanho do gel e do papel filtro;
6.Coloque a membrana de nitrocelulose na solução tampão;
7.Retire os 3 pedaços de papel de filtro e deixe cair a solução tampão extra até que nenhuma solução tampão caia da membrana;e em seguida coloque o papel filtro na parte inferior do DYCP-40C;
8.Retire o gel das placas de vidro, limpe suavemente o gel de empilhamento e coloque o gel na solução tampão;
9.Coloque o gel sobre o papel de filtro, começando por uma das pontas do gel para evitar bolhas de ar;
10.Utilize uma ferramenta adequada para retirar as bolhas de ar entre o gel e o papel filtro.
11.Cubra a membrana de nitrocelulose no gel, com o lado áspero voltado para o gel.E então use uma ferramenta adequada para remover as bolhas de ar entre a membrana e o gel.Coloque 3 pedaços de papel filtro na membrana.Ainda é necessário usar uma ferramenta adequada para tirar as bolhas de ar entre o papel filtro e a membrana.
12.Cubra a tampa e defina os parâmetros de execução da eletroforese, a corrente constante 80mA;
13.A eletroforese está feita.Obtemos o resultado da seguinte forma;
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Horário da postagem: 04/04/2023