O que é eletroforese em gel de poliacrilamida?

Eletroforese em gel de poliacrilamida

A eletroforese em gel é uma técnica fundamental em laboratórios de todas as disciplinas biológicas, permitindo a separação de macromoléculas como DNA, RNA e proteínas.Diferentes meios e mecanismos de separação permitem que subconjuntos destas moléculas sejam separados de forma mais eficaz, explorando as suas características físicas.Para proteínas em particular, a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) é frequentemente a técnica de escolha.

PAGE é uma técnica que separa macromoléculas como proteínas com base na sua mobilidade eletroforética, ou seja, na capacidade dos analitos de se moverem em direção a um eletrodo de carga oposta.No PAGE, isso é determinado pela carga, tamanho (peso molecular) e formato da molécula.Os analitos movem-se através dos poros formados no gel de poliacrilamida.Ao contrário do DNA e do RNA, a carga das proteínas varia de acordo com os aminoácidos incorporados, o que pode influenciar o modo como funcionam.As cadeias de aminoácidos também podem formar estruturas secundárias que afetam seu tamanho aparente e, consequentemente, como são capazes de se mover através dos poros.Portanto, às vezes pode ser desejável desnaturar as proteínas antes da eletroforese para linearizá-las, caso seja necessária uma estimativa mais precisa do tamanho.

PÁGINA FDS

A eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio é uma técnica usada para separar moléculas de proteínas com massas de 5 a 250 kDa.As proteínas são separadas apenas com base no seu peso molecular.O dodecilsulfato de sódio, um surfactante aniônico, é adicionado na preparação de géis que mascara as cargas intrínsecas das amostras de proteínas e lhes confere uma relação carga/massa semelhante.Em palavras simples, desnatura as proteínas e dá-lhes uma carga negativa.

PÁGINA nativa

Native PAGE é uma técnica que utiliza géis não desnaturados para a separação de proteínas.Ao contrário do SDS PAGE, nenhum agente desnaturante é adicionado na preparação de géis.Como resultado, a separação das proteínas ocorre com base na carga e no tamanho das proteínas.Nesta técnica, a conformação, o dobramento e as cadeias de aminoácidos das proteínas são os fatores dos quais depende a separação.As proteínas não são danificadas neste processo e podem ser recuperadas após a conclusão da separação.

Como funciona a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE)?

O princípio básico do PAGE é separar os analitos passando-os pelos poros de um gel de poliacrilamida por meio de corrente elétrica.Para conseguir isso, uma mistura de acrilamida-bisacrilamida é polimerizada (poliacrilamida) pela adição de persulfato de amônio (APS).A reação, que é catalisada pela tetrametiletilenodiamina (TEMED), forma uma estrutura em forma de rede com poros através dos quais os analitos podem se mover (Figura 2).Quanto maior for a percentagem de acrilamida total incluída no gel, menor será o tamanho dos poros e, portanto, menores serão as proteínas que poderão passar.A proporção de acrilamida para bisacrilamida também terá impacto no tamanho dos poros, mas muitas vezes é mantida constante.Tamanhos de poros menores também reduzem a velocidade com que pequenas proteínas são capazes de se mover através do gel, melhorando sua resolução e evitando que elas escorram rapidamente para o buffer quando a corrente é aplicada.

Equipamento para eletroforese em gel de poliacrilamida

Célula de eletroforese em gel (tanque/câmara)
O tanque de gel para eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) é diferente do tanque de gel de agarose.O tanque de gel de agarose é horizontal, enquanto o tanque PAGE é vertical.Pela célula de eletroforese vertical (tanque/câmara), um gel fino (normalmente 1,0 mm ou 1,5 mm) é derramado entre duas placas de vidro e montado de modo que a parte inferior do gel fique submersa em tampão em uma câmara e a parte superior seja submersa em tampão em outra câmara.Quando a corrente é aplicada, uma pequena quantidade de tampão migra através do gel da câmara superior para a câmara inferior.Com pinças fortes para garantir que o conjunto permaneça na posição vertical, o equipamento facilita a passagem rápida do gel com resfriamento uniforme, resultando em faixas distintas.

(Liuyi Biotechnology) fabrica uma variedade de tamanhos de células de eletroforese em gel de poliacrilamida (tanques/câmaras).Os modelos DYCZ-20C e DYCZ-20G são células verticais de eletroforese (tanques/câmaras) para análise de sequenciamento de DNA.Algumas das células verticais de eletroforese (tanques/câmaras) são compatíveis com o sistema de blotting, como o modelo DYCZ-24DN, DYCZ-25D e DYCZ-25E são compatíveis com o sistema de Western Blotting modelo DYCZ-40D, DYCZ-40G e DYCZ-40F, que são usados ​​para transferir a molécula de proteína do gel para a membrana.Após a eletroforese SDS-PAGE, Western Blotting é uma técnica para detectar uma proteína específica em uma mistura de proteínas.Você pode escolher esses sistemas de manchas de acordo com os requisitos experimentais.

Fonte de alimentação para eletroforese
Para fornecer eletricidade para o funcionamento do gel, você precisará de uma fonte de alimentação para eletroforese.Na Liuyi Biotechnology, fornecemos uma variedade de fontes de alimentação para eletroforese para todas as aplicações.Os modelos DYY-12 e DYY-12C com alta tensão e corrente estáveis ​​podem atender aos requisitos de eletroforese de alta tensão.Possui função de suporte, cronometragem, VH e aplicação passo a passo.Eles são ideais para aplicações de eletroforese de IEF e sequenciamento de DNA.Para aplicação geral de eletroforese de proteínas e DNA, temos os modelos DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 e assim por diante, que também são fontes de alimentação de grande venda com células de eletroforese (tanques/câmaras).Eles podem ser usados ​​para aplicações de eletroforese de média e baixa tensão, como para uso em laboratório escolar, laboratório hospitalar e assim por diante.Mais modelos de fontes de alimentação, visite nosso website.

A marca Liuyi tem mais de 50 anos de história na China e a empresa pode fornecer produtos estáveis ​​e de alta qualidade em todo o mundo.Através de anos de desenvolvimento, vale a pena sua escolha!

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Referências para O que é eletroforese em gel de poliacrilamida?
1. Karen Steward PhD Eletroforese em gel de poliacrilamida, como funciona, variantes de técnica e suas aplicações